實(shí)時(shí)熒光定量PCR數(shù)據(jù)中的基本概念：

在整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)基線期，指數(shù)期，線性期和平臺(tái)期。其中在基線期和指數(shù)增長(zhǎng)期，擴(kuò)增產(chǎn)物都是以指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)，但是在基線期我們沒(méi)辦法檢測(cè)；而到了線性期和平臺(tái)期之后，由于不同基因，或者不同條件下其擴(kuò)增效率差別很大，因此沒(méi)有辦法計(jì)算模板的含量。因此，在指數(shù)增長(zhǎng)期的CT值就成了計(jì)算模板含量的關(guān)鍵值。

▲ 圖一：線性圖譜

▲ 圖二：對(duì)數(shù)圖譜

為什么知道CT值就能夠得到最初的目標(biāo)基因含量呢？

如圖三，表示一個(gè)基因單次擴(kuò)增曲線。N為擴(kuò)增產(chǎn)物的分子數(shù)，模板的分子數(shù)乘以1+擴(kuò)增效率的n次方，n代表循環(huán)次數(shù)。也就是說(shuō)，如果擴(kuò)增效率為100%，產(chǎn)物的分子數(shù)就等于模板數(shù)乘以2的n次方。但是在線性增長(zhǎng)期和平臺(tái)期，擴(kuò)增效率不可能是100%，因此PCR理論方程只在指數(shù)期成立，也就是圖三綠色框的部分。

▲ 圖三

數(shù)據(jù)處理：

以下三張圖分別表示我們?cè)谧鰺晒舛縋CR時(shí)提到的三個(gè)名稱：擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線、溶解曲線。

1、juedui定量：使用一系列稀釋的已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品與未知樣本同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品的CT值與起始模板量之間的線性比例關(guān)系。

注意事項(xiàng)：

?  標(biāo)準(zhǔn)品必須來(lái)源可靠，濃度已知。

?  標(biāo)準(zhǔn)品要和待測(cè)樣品同時(shí)在儀器中擴(kuò)增。

?  只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品覆蓋的濃度范圍進(jìn)行待測(cè)樣本濃度的推測(cè)。

2、相對(duì)定量：是用來(lái)確定經(jīng)過(guò)不同處理的樣品之間的表達(dá)差異或目標(biāo)在不同時(shí)相差的表達(dá)差異，也就是倍數(shù)差異。

Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)

來(lái)自美國(guó)Azure Biosystems公司，以創(chuàng)新服務(wù)于生命科學(xué)為愿景。Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)融合了高品質(zhì)Peltier溫度模塊和基于光纖傳輸?shù)墓鈱W(xué)檢測(cè)系統(tǒng)，為您的科學(xué)研究提供高精準(zhǔn)、高靈敏的可靠結(jié)果。Azure Cielo 3/6檢測(cè)通道，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活配置。同時(shí)配有10.3觸控系統(tǒng)，主機(jī)本身可獨(dú)立運(yùn)行、連接、遠(yuǎn)程交互，讓您隨時(shí)隨地知悉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和及時(shí)獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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既然儀器已經(jīng)備好了，那么該怎樣選擇檢測(cè)方法呢？

眾所周知，qPCR依托于熒光檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)使用DNA結(jié)合染料、熒光PCR引物或探針等實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)目的基因的擴(kuò)增，從而對(duì)目的基因進(jìn)行定量分析。為了避免在實(shí)驗(yàn)時(shí)出差錯(cuò)，下面就跟著小編一起來(lái)看一下常用的經(jīng)典方法吧~

1、 DNA結(jié)合染料—SYBR Green I 法

?  原理：SYBR Green I 是一種DNA結(jié)合染料，其與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強(qiáng)，DNA與染料結(jié)合所釋放的熒光量與dsDNA的數(shù)量成正比。因此，檢測(cè)到的熒光信號(hào)可反映出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。

?  特征：可逆熒光，Z大吸收波長(zhǎng)497nm，Z大發(fā)射波長(zhǎng)520nm。

?  適用情況：非特異性的熒光染料，不能識(shí)別特定的雙鏈，只要是雙鏈（包括非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物、引物二聚體等）就會(huì)結(jié)合發(fā)光，在臨床上使用可能會(huì)有假陽(yáng)性發(fā)生。但該方法容易建立實(shí)驗(yàn)體系，可進(jìn)行熔點(diǎn)分析，通用性好，價(jià)格相對(duì)較低，在科研中使用比較普遍。

2 、TaqMan 探針?lè)?/span>

?  原理：檢測(cè)時(shí)除了需要一對(duì)特異性引物外，還需要一條與靶序列互補(bǔ)配對(duì)的寡核苷酸鏈—TaqMan探針，其5’末端包含熒光報(bào)告基團(tuán)R，3’末端為淬滅基團(tuán)Q。當(dāng)探針與靶序列互補(bǔ)配對(duì)時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’端的淬滅基團(tuán)接近而淬滅。在進(jìn)行延伸反應(yīng)時(shí)，聚合酶的5’核酸外切酶活性將探針切斷，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離，發(fā)射熒光。熒光信號(hào)和產(chǎn)物的量相匹配。

?  特征：檢測(cè)到的是積累熒光，隨著循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來(lái)的熒光基團(tuán)不斷積累。

?  適用情況：特異性較強(qiáng)，可進(jìn)行多重qPCR分析，但成本較染料法要高一些，實(shí)驗(yàn)構(gòu)建相對(duì)復(fù)雜。常用的熒光基團(tuán)推薦：FAM、VIC、HEX、CY5等。

3 、分子信標(biāo)(molecular beacon)

?  原理：分子信標(biāo)方法在檢測(cè)時(shí)除了需要一對(duì)引物以外，還需要一條呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)的寡核苷酸探針（25-40nt），分子信標(biāo)的 5'端附有熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端附有淬滅基團(tuán)，環(huán)被設(shè)計(jì)成與靶序列互補(bǔ)的15–30核苷酸，其兩端各有5-7個(gè)核苷酸互補(bǔ)形成莖結(jié)構(gòu)，將報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)連接到一起。發(fā)夾結(jié)構(gòu)中，由于報(bào)告基團(tuán)接近淬滅基團(tuán)，監(jiān)測(cè)不到熒光信號(hào)，當(dāng)環(huán)的部分與核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，分子信標(biāo)打開(kāi)成鏈狀，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分開(kāi)，發(fā)射熒光。

?  特征：莖環(huán)結(jié)構(gòu)，也是積累熒光。

?  適用情況：高特異性、可以用于多重反應(yīng)，適合區(qū)分等位基因。但不能做熔點(diǎn)分析；發(fā)夾的莖結(jié)合過(guò)強(qiáng)過(guò)弱都不合適，過(guò)強(qiáng)的話，信標(biāo)不能與靶標(biāo)正確雜交，過(guò)弱的話，會(huì)隨機(jī)折疊成非發(fā)夾結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致產(chǎn)生雜信號(hào)。常用的熒光基團(tuán)有FAM 、Texas Red等。

4  、熒光共振能量傳遞(FRET)

?  原理：FRET探針又稱雙雜交探針，由兩條相鄰探針組成。一個(gè)探針3'端帶有供體基團(tuán)，第二個(gè)探針的5'端帶有受體基團(tuán)，在PCR反應(yīng)的退火步驟，兩條探針頭尾相連地分別雜交在靶標(biāo)序列上，熒光分子接近，從供體到受體產(chǎn)生熒光共振能量傳遞，受體熒光信號(hào)的增加與擴(kuò)增子出現(xiàn)的量成比例。

?  特征：由于FRET探針是靠近發(fā)光，所以檢測(cè)信號(hào)是實(shí)時(shí)信號(hào)，而非積累熒光。

?  適用情況：除引物外需要設(shè)計(jì)兩條探針，通用性不高；需挑選合適的供體及受體基團(tuán)，供體基團(tuán)發(fā)射波長(zhǎng)與受體基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)需顯著重疊，而供體基團(tuán)發(fā)射波長(zhǎng)與受體基團(tuán)的發(fā)射波長(zhǎng)要明顯分離。可做熔點(diǎn)分析，特異性較強(qiáng)。

5 、 LUX Primers

?  原理：LUX (light upon extention) 引物是通過(guò)熒光標(biāo)記的引物，使引物可以實(shí)現(xiàn)探針的功能。其原理和分子信標(biāo)類似，LUX引物也是發(fā)夾結(jié)構(gòu)，其中一條引物3’端用熒光報(bào)告基團(tuán)標(biāo)記。在沒(méi)有單鏈模板的情況下，該引物自身配對(duì)，形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，使熒光淬滅。在模板存在的情況下，引物與模板配對(duì)，發(fā)夾結(jié)構(gòu)打開(kāi)，產(chǎn)生熒光信號(hào)。

?  特征：積累熒光；不需要額外設(shè)計(jì)探針。

?  適用情況：不能進(jìn)行熔點(diǎn)分析，通用性比不上SYBR Green I。但不需要專門(mén)設(shè)計(jì)探針，同時(shí)不會(huì)受非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物和引物二聚體的影響，特異性較SYBR Green I強(qiáng)。

【以上內(nèi)容來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)整理，侵刪】

看完了上面關(guān)于經(jīng)典qPCR檢測(cè)方法的介紹，您是不是有想去跑一輪qPCR的沖動(dòng)呢？

美國(guó)Azure Biosystems公司的Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)，提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求靈活配置。

?   數(shù)據(jù)可靠性: 連續(xù)1000次實(shí)驗(yàn)后，結(jié)果高度一致，溫控jing準(zhǔn)，性能穩(wěn)定可靠。

?  應(yīng)用靈活性: 提供多種qPCR應(yīng)用分析，定制化報(bào)告。

?   流程智能化: 中英文用戶界面，觸控操作，可多機(jī)聯(lián)用。

?   交互靈活性: 主機(jī)可獨(dú)立運(yùn)行qPCR程序，電腦、Wi-Fi、網(wǎng)絡(luò)交互。

PCR八聯(lián)管,0.1ml8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋,透明本生生物公司供應(yīng)：熒光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量離心管，進(jìn)口凍存管，細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，色譜耗材，針頭過(guò)濾器，分光光度計(jì)。

型號(hào)：23-2080
品名：PCR八聯(lián)管,0.1ml8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋,透明
規(guī)格：125 條/盒, 10盒/箱
描述：0.1ml 8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管+蓋, 平蓋 無(wú)DNA酶無(wú)RNA酶無(wú)熱源,透明
PCR八聯(lián)管,0.1ml8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋,透明
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
1 超透明，低吸附。
2 PCR管更易封蓋，保證無(wú)外來(lái)空氣引發(fā)的氣溶膠污染。
3 用*高等級(jí)的進(jìn)口聚丙烯獨(dú)特配方改良而成，比同類產(chǎn)品更好的導(dǎo)熱率，快速的反應(yīng)和均一的熱導(dǎo)性。
4 使用高精密通量模具生產(chǎn)PCR耗材，確保塑料原料在模具中的散布均一性和同步性。
產(chǎn)品用途：適配于0.1ml8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管。

PCR八聯(lián)管,0.1ml8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋,透明推薦產(chǎn)品：0.1ml PCR透明八聯(lián)管
0.1ml PCR乳白色八聯(lián)管
熒光定量PCR八聯(lián)管光學(xué)平蓋
0.1ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR透明八聯(lián)管
0.2ml PCR乳白色八聯(lián)管
熒光定量PCR八聯(lián)管光學(xué)平蓋
0.2ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR凸蓋單管
無(wú)裙邊96孔*0.1ml PCR板
無(wú)裙邊96孔*0.1ml PCR板
Roche480專用PCR96孔板
0.2ml PCR帶托架平蓋單管
全裙邊96孔*0.1ml PCR板
熒光定量PCR 板光學(xué)封板膜
全裙邊384孔*40ul PCR板
全裙邊384孔*40ul PCR板
0.5~10ul無(wú)菌盒裝吸嘴（PC材質(zhì)）透明96支/盒, 50盒/箱
0.5~10ul無(wú)菌盒裝吸嘴（PP材質(zhì)）透明96支/盒, 50盒/箱

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：本生生物代理實(shí)驗(yàn)室耗材,PCR耗材品種全，可替代儀器原廠耗材，性價(jià)比高，質(zhì)量穩(wěn)定，對(duì)用戶可以節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。
適應(yīng)客戶：醫(yī)院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室，中心實(shí)驗(yàn)室心；第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所，大專院校，制藥廠，試劑生產(chǎn)廠家，疾控中心，檢驗(yàn)檢疫。

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品名：PCR八聯(lián)管,0.1ml8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋,透明
規(guī)格：125 條/盒, 10盒/箱
描述：0.1ml 8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管+蓋, 平蓋 無(wú)DNA酶無(wú)RNA酶無(wú)熱源,透明
PCR八聯(lián)管,0.1ml8聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋,透明
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1 超透明，低吸附。
2 PCR管更易封蓋，保證無(wú)外來(lái)空氣引發(fā)的氣溶膠污染。
3 用*高等級(jí)的進(jìn)口聚丙烯獨(dú)特配方改良而成，比同類產(chǎn)品更好的導(dǎo)熱率，快速的反應(yīng)和均一的熱導(dǎo)性。
4 使用高精密通量模具生產(chǎn)PCR耗材，確保塑料原料在模具中的散布均一性和同步性。
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熒光定量PCR八聯(lián)管光學(xué)平蓋
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熒光定量PCR八聯(lián)管光學(xué)平蓋
0.2ml PCR平蓋單管
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熒光定量PCR 板光學(xué)封板膜
全裙邊384孔*40ul PCR板
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0.5~10ul無(wú)菌盒裝吸嘴（PC材質(zhì)）透明96支/盒, 50盒/箱
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PCR八聯(lián)管,0.2ml12聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋本生生物公司供應(yīng)：熒光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量離心管，進(jìn)口凍存管，細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，色譜耗材，針頭過(guò)濾器，分光光度計(jì)。

型號(hào)：23-2084
品名：PCR八聯(lián)管,0.2ml12聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋
規(guī)格：200套/盒，10盒/箱
描述：0.2ml 12聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管+蓋，透明，超薄壁, 平蓋,非滅菌
PCR八聯(lián)管,0.2ml12聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋
實(shí)時(shí)PCR使用的PCR產(chǎn)品:
在普通PCR之外，每個(gè)產(chǎn)品，從單個(gè)PCR管、PCR八聯(lián)排管到PCR板，都通過(guò)實(shí)時(shí)PCR應(yīng)用測(cè)試。所有的PCR管和排管的蓋子均設(shè)計(jì)能夠使熒光信號(hào)通過(guò)，到達(dá)PCR儀光學(xué)檢測(cè)單元。
對(duì)于八聯(lián)排管和PCR板的密封，有兩種不同的排蓋。半圓形的八聯(lián)排管蓋，有一小塊平的可透光的區(qū)域。然而實(shí)時(shí)PCRMax佳的選擇是EU可透光的全平八聯(lián)排管蓋。
它極其透明的如玻璃般的區(qū)域，具有光學(xué)封板膜良好的特質(zhì)，與封板膜相比，他們沒(méi)有黏附的缺點(diǎn)，展示了較好的密封性，因此蒸發(fā)率極低。

PCR八聯(lián)管,0.2ml12聯(lián)排實(shí)時(shí)熒光定量PCR管平蓋推薦產(chǎn)品：0.1ml PCR透明八聯(lián)管
0.1ml PCR乳白色八聯(lián)管
熒光定量PCR八聯(lián)管光學(xué)平蓋
0.1ml PCR平蓋單管
0.2ml PCR透明八聯(lián)管
0.2ml PCR乳白色八聯(lián)管
熒光定量PCR八聯(lián)管光學(xué)平蓋
0.2ml PCR平蓋單管
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無(wú)裙邊96孔*0.1ml PCR板
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0.2ml PCR帶托架平蓋單管
全裙邊96孔*0.1ml PCR板
熒光定量PCR 板光學(xué)封板膜
全裙邊384孔*40ul PCR板
全裙邊384孔*40ul PCR板
0.5~10ul無(wú)菌盒裝吸嘴（PC材質(zhì)）透明96支/盒, 50盒/箱
0.5~10ul無(wú)菌盒裝吸嘴（PP材質(zhì)）透明96支/盒, 50盒/箱

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：本生生物代理實(shí)驗(yàn)室耗材,PCR耗材品種全，可替代儀器原廠耗材，性價(jià)比高，質(zhì)量穩(wěn)定，對(duì)用戶可以節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。
適應(yīng)客戶：醫(yī)院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室；第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所，大專院校，制藥廠，試劑生產(chǎn)廠家，疾控，檢驗(yàn)檢疫。

介紹：

Azure Cielo? 3和Cielo? 6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)具有ZY的靈敏度。該系統(tǒng)配置新型的高性能光學(xué)系統(tǒng)，采用16組光纖單孔掃描設(shè)計(jì)，一根光纖用于高能LED激發(fā)，另一根用于光信號(hào)檢測(cè)，可16孔同時(shí)采集(圖1)。特殊的激發(fā)/發(fā)射方式保證單孔掃描時(shí)僅激發(fā)一個(gè)孔，光纖傳導(dǎo)也有效消除光散射，完全避免孔外區(qū)域的激發(fā)，減少背景噪聲的來(lái)源，以便更靈敏的檢測(cè)。

同時(shí)Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)采用“全孔檢測(cè)”技術(shù)，每個(gè)孔可采集大約100,000個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。檢測(cè)時(shí)取讀數(shù)的平均值，JZ測(cè)定每個(gè)孔的熒光強(qiáng)度。這種“全孔檢測(cè)”為每個(gè)采集時(shí)間點(diǎn)提供了比單孔掃描系統(tǒng)更準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，因?yàn)閱慰讙呙柘到y(tǒng)僅僅采集少量的數(shù)據(jù)點(diǎn)。

如何可靠地檢測(cè)低拷貝數(shù)的靶標(biāo)呢？首先要考慮引物和探針的特異性，這會(huì)直接影響qPCR檢測(cè)能力的高低，其次考慮靈敏度，即當(dāng)探針信號(hào)高于背景噪聲時(shí)儀器檢測(cè)的靈敏度。在其他的反應(yīng)成分相同的情況下，更高靈敏度的儀器可以更早的檢測(cè)到信號(hào)或得到更小的Cq值。為了證明Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)在低拷貝數(shù)的靶標(biāo)檢測(cè)中的靈敏度和重復(fù)性，進(jìn)行了單拷貝靶標(biāo)DNA的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。

方法：

配制20μl反應(yīng)體系，利用單拷貝DNA為模板進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。

分別在Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品的系統(tǒng)上運(yùn)行兩次96孔板。使用每個(gè)儀器提供的軟件收集和分析數(shù)據(jù)，以確定每個(gè)孔的Cq值。

結(jié)果與討論：

單拷貝DNA擴(kuò)增結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)中檢測(cè)到88個(gè)孔(92%)有熒光信號(hào)，競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品中檢測(cè)到77個(gè)孔(80%)(圖2A)，結(jié)果表明，Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)提高了單拷貝擴(kuò)增的檢測(cè)概率，這也反映了其檢測(cè)靈敏度更高。那么對(duì)于單拷貝DNA擴(kuò)增來(lái)說(shuō)，那些沒(méi)有熒光信號(hào)的孔可能是靶標(biāo)DNA沒(méi)有進(jìn)入到孔中，所以沒(méi)有檢測(cè)到熒光信號(hào)。

同時(shí)發(fā)現(xiàn)，Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)測(cè)量的Cq平均值比競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品要早2個(gè)循環(huán)(Cq 36.39 vs 38.53)(圖2A)。并且Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的Cq值SD小于競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品的值(0.91 vs 1.16)，這進(jìn)一步說(shuō)明了Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的檢測(cè)具有良好的重復(fù)性。

此外，將兩者的擴(kuò)增曲線進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品上某些擴(kuò)增曲線起峰較晚，擴(kuò)增曲線起峰位置不一致（圖3B），Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)的擴(kuò)增曲線起峰位置基本一致（圖3A）。這也說(shuō)明了Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)高靈敏度的“全孔檢測(cè)”技術(shù)和多數(shù)據(jù)點(diǎn)的捕獲方式可以給您帶來(lái)真實(shí)可靠的擴(kuò)增結(jié)果。

總的來(lái)說(shuō)，隨著靶標(biāo)DNA數(shù)量的減少，qPCR的可靠性也會(huì)逐漸降低，然而現(xiàn)代應(yīng)用不斷突破這一技術(shù)的極限，對(duì)qPCR的性能提出了更高的要求。以上結(jié)果證明了Azure Cielo?實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)具有ZY的靈敏度和可靠性，即使檢測(cè)單拷貝DNA分子，仍可獲得具有高度重復(fù)性的定量數(shù)據(jù)。

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