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超微量分光光度計

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詳細介紹

QNano是一種紫外可見光分光光度計,專用于對提純后的核酸和多種蛋白質進行微體積分析。QNano自帶預裝軟件和觸摸顯示屏。超微量分光光度計可以檢測0.5~2 μL的樣本,并且具有非常高的準確性和重復性。樣本保留系統應用表面張力把樣本保留在兩根檢測光纖中間,使得儀器可以檢測較高濃度的樣本而不用稀釋。應用該技術,全波長(200~800 nm)QNano超微量分光光度計所能檢測樣本的最高濃度是標準比色皿的上百倍。

該設備質保期為2年。

儀器配備一個比色皿架,以便使用標準紫外可見光比色皿對稀釋樣品進行分析。

【80480ES-超微量分光光度計操作視頻】https://www.bilibili.com/video/BV1ie411U76G

 

產品清單

 

主機

1臺

電源適配器

1個

操作手冊

1本

合格證

1個

 

結構示意

image.png 

(圖片供參考,具體以實物為主)

 

技術參數

 

QNano

樣品量

0.5 μL ~ 2 μL,建議2 μL

光程

0.05 mm0.2 mm1 mm

光源/壽命

氙閃爍燈/閃爍次數>109

檢測器類型

2048象素線型硅CCD陣列

波長范圍

200 ~ 800 nm

波長準確性

±1 nm

波長分辨率

≤3 nm

吸收光精密度

0.003吸光度值(1 mm光程)

吸收光精確度

±1%(360 nm波長下,7.332個吸光度)

吸光度范圍

0.02 ~ 300A360 nm波長下,等同于10 mm光程時)

檢測濃度范圍

2 ng/μL dsDNA ~ 15000 ng/μL dsDNA

檢測時間

<6 s

OD600

吸光度范圍

0~4.000 Abs

吸光度穩定性

[0,3) ≤0.3%, [3,4) ≤2%

吸光度重復性

[0,3) ≤0.2%, [3,4) ≤2%

吸光度準確性

[0,2) ≤0.005A, [2,3) ≤1%, [3,4) ≤2%

輸入電壓

DC12V 4A

功率

25 W

外形尺寸

270*210*196 mmW*D*H

重量

3.6 kg

 

操作指南

上樣操作指南

image.png

 

spacer.gifa) 抬起上基座,用精密移液器把微量樣品(2 μL)加到下基座上。

【注】:檢測時,液體樣本的使用量不是檢測準確的關健因素,但是必須保證上基座與下基座之間能形成完整的液柱,這樣才能確保檢測的準確性。取樣時最好使用量程為(0-2 μL)精密移液器和tip頭來取樣,確保取樣的準確性。如果對樣本的特征或者移液器精確性不太確認,最好使用2 μL樣本量來做檢測。

圖片3.png

 

b) 放下上基座,在上基座與下基座之間自然形成液柱,然后開始檢測。

 

 image.png

 

c) 檢測完成后,抬起上基座,用干凈的無塵布把上下基座上的樣品擦干凈,以免樣品殘留影響下次檢測。

【注】: 測試結束后,請用純凈水清洗檢測頭3次。

圖片4.png

d) QNano具有OD600檢測功能,使用時將上基座抬起,進入OD600界面,先進行空白校對,根據實驗要求不同,空白可以是空氣、空比色皿,或含空白溶液的比色皿。空白校對完成后,在比色皿中加入2~3 mL的待測溶液,插入比色皿插槽,點擊樣品檢測,即可完成OD600檢測。

 

【注】: 圖中箭頭方向為檢測(光照)方向,比色皿插入插槽時透明面應與箭頭方向垂直。

 

軟件操作指南
圖片5.png

1. 儀器自檢:聯接電源,放下上基座,按下儀器背面電源開關,儀器啟動,進入自檢界面;
2. 自檢完成后,進入主界面,界面中顯示各種應用界面; 

3. 核酸檢測

1) 概述:使用QNano可以很方便地檢測核酸的濃度;

圖片6.png 

使用Beer-Lambert定律計算核酸濃度:

圖片7.png

C=核酸濃度,單位ng/ μL

A=AU的吸光度

   ε=消光系數,單位ng-cm/ μL

b=光程,單位cm

通常情況下核酸的消光系數為:

雙鏈DNA:50 ng-cm/ μL

單鏈DNA:33 ng-cm/ μL

RNA:40 ng-cm/ μL

當選擇基座模式,QNano使用1.0 mm或0.2 mm光程進行檢測,這樣不用稀釋就可以檢測高濃度樣品。

核酸檢測的吸光度是被標準化為1 cm光程下的數值。

QNano可以準確檢測濃度≤15000 ng/μL的雙鏈DNA而不用稀釋,對每個樣品,軟件會自動選擇最佳的檢測光程進行檢測。

 

圖片8.png

2) 界面解析:在主界面選擇“核酸檢測”,進入如下界面;

 

上圖所示界面中,左側頂部為核酸檢測界面、數據兩個選項,可點擊相應區域進入各自功能區。

:項目名稱,可根據需要選取一個合適又好記的名稱。可以是樣品名稱,也可以是客戶名稱,等等。

:樣品批號,默認為當前時間,可根據需要重新設定。一個ID可以保存多達1000條檢測結果。

:點擊選擇核酸類型,選擇DNA-50做dsDNA檢測,RNA-40做RNA檢測,ssDNA-33做單鏈DNA檢測,選擇“其他”時,可根據需要輸入核酸因子。儀器將根據設定的核酸因子進行計算。

:在對樣品進行檢測之前,必須先用緩沖液做空白,緩沖液的吸光度一般在0.004-0.03 Abs 之間。一般情況下,30 min以后我們建議用戶重做空白。

:在空白校對之后,單擊該按鈕,對樣品進行檢測。

:樣品測試結束后,單擊該按鈕,對光譜數據進行保存。

:可以在該項目下進行測試。

:可選擇或取消基線校準。核酸檢測默認的基線校準波長為340 nm,用戶可根據試驗需要輸入不同的校準波長。一般情況下,基線可以選取在對被測物質不敏感的波長值。在任何情況下,基線設定的波長下的吸光度,所有波長的吸光度讀數都是減去這個值的結果。

【注】:基線校準必須在進行樣品檢測之前設定,樣品檢測之后設定無效。不選擇基線校準,光譜值將會產生偏移,計算的濃度也會改變。

3) 操作步驟:

設定項目名稱與樣品編號;

使用緩沖液建立空白對照:取2 μL空白溶液加到下基座上,放下上基座并點擊“空白”;

使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈;

2 μL樣品滴加到下基座上,放下上基座,點擊“樣品檢測”進行檢測,檢測完成后界面如下圖;

【注】:每次檢測的樣品都必須是剛加入的。

檢測完成后,必須用干凈的無塵布擦掉上下基座上的樣品,才可以檢測下一個樣品。

4) 檢測結果示意:

圖片9.png

 

 

濃度:核酸樣品的濃度值;

A260:顯示10 mm光程下的260 nm處的吸光度;

A280:顯示10mm光程下的280 nm處的吸光度;

A230:顯示10 mm光程下的230 nm處的吸光度;

A260/A280:260 nm和280 nm處的吸光度的比值,這個值用來判定DNA和RNA的純度。純DNA的比值在1.8左右,純RNA的比值在2.0左右。如果這個比值偏小,表明有蛋白、苯酚或其他污染物存在;

A260/A230:260 nm和230 nm處的吸光度的比值,這是一個次要的核酸濃度指示值。純核酸的這個比值比260/280比值大,一般在1.8-2.2之間,如果比值偏低,表示核酸中有污染物。

5) 查看檢測數據:
點擊切換按鈕的“歷史數據”,進入核酸數據界面。該界面顯示全部檢測數據,選中一個樣品編號ID,中間區域顯示當前ID下的所有檢測結果。

 

 圖片10.png

 

:顯示光譜,勾選中對應的數據,單擊該按鈕,可以在本界面查看200-800 nm每個波長的吸光度。

:導出數據,將選中的檢測數據導出。一般情況下,導出默認到U盤中。

:批量打印,批量打印選中的數據。

:刪除數據,將選中的數據刪除。

:刪除文件,單擊該按鈕,彈出選擇刪除文件對話框,單擊確定,將選中的ID文件刪除。

:刪除項目,單擊該按鈕,彈出選擇刪除文件對話框,單擊確定,將選中的項目文件刪除。

4. 蛋白A280檢測

1) 概述:

蛋白和核酸不一樣,具有很強的多樣性。Protein A280功能應用于檢測那些含有Trp、Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白,這些蛋白在280 nm吸光度明顯。本機方法不需要構建標準曲線,而是檢測吸光度后,直接計算蛋白濃度。

Protein A280顯示紫外吸收光譜,檢測280 nm處的吸光度后計算濃度(mg/mL)。和核酸檢測一樣,Protein A280記錄顯示的是10 mm光程下的數據。

QNano在基座模式下可以最多檢測400 mg/mL的BSA而不用稀釋。

當檢測樣品的吸光后的光強小于200時(10 mm光程下),軟件會提示用戶選擇更小的測量光程,以保證測試的準確性。熒幕如下圖顯示。

決定液體表面張力的主要因素是溶液中水分子之間的氫鍵,通常情況下,水中的物質,如蛋白、鹽離子、去污劑等都會通過破壞水分子之間的氫鍵來減小表面張力。雖然對于大部分樣品來說,1 μL的量就足夠用于檢測了,但由于表面張力下降,我們建議使用2 μL的量以保證形成液柱。

圖片11.png

2) 界面解析:在主界面選擇“蛋白A280”圖標進入如下界面;

上圖所示界面中,左側頂部為核酸檢測界面、數據兩個選項,可點擊相應區域進入各自功能區。

:項目名稱,可根據需要選取一個合適又好記的名稱。可以是樣品名稱,也可以是客戶名稱,等等。

:樣品批號,默認為當前時間,可根據需要重新設定。一個ID可以保存多達1000條檢測結果。

:點擊選擇類型,當選擇“其他”時,可根據需要輸入數值。儀器將根據設定的數值進行計算。

:在對樣品進行檢測之前,必須先用緩沖液做空白,緩沖液的吸光度一般在0.004-0.03 Abs之間。一般情況下,30 min以后我們建議用戶重做空白。

:可選擇或取消基線校準。蛋白檢測默認的基線校準波長為340 nm,用戶可根據試驗需要輸入不同的校準波長。在任何情況下,基線都自動設定為選擇波長下的吸光度,所有波長的吸光度讀數都是減去這個值的結果。

【注】:基線校準必須在進行樣品檢測之前設定,樣品檢測之后設定無效。不選擇基線校準,光譜值將會產生偏移,計算的濃度也會改變。

3) 操作步驟:

設定項目名稱和樣品編號與蛋白類型;

使用緩沖液建立空白對照:取2 μL空白溶液加到下基座上,放下上基座并點擊“空白”;

使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈;

2 μL樣品滴加到下基座上,放下上基座,點擊“樣品檢測”進行檢測,檢測完成后界面如下圖;

【注】:每次檢測的樣品都必須是剛加入的。

檢測完成后,必須用干凈的無塵布擦掉上下基座上的樣品,才可以檢測下一個樣品。

 圖片12.png

 

4) 檢測結果示意:

濃度:蛋白樣品的的濃度值;

A260:顯示10 mm光程下的260 nm處的吸光度;

A280:顯示10 mm光程下的280 nm處的吸光度;

A260/A280:260 nm和280 nm處的吸光度的比值。

 

圖片13.png

5) 查看檢測數據:

該界面布局同核酸檢測數據界面相同,同名按鍵操作與功能相同,詳細信息請參考核酸檢測章節。

5. 比色法

1) 概述:

BCA、Lowry、Bradford都是通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法。比色法檢測蛋白濃度時必須構建一個標準曲線,因此將這三種測量蛋白的方法集合在比色法中。

BCA是一種通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法,它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測以及那些含有在紫外區域有光吸收的雜質的蛋白的濃度檢測。BCA法是檢測Cu+1離子的方法,在堿性環境下,Cu+2離子會被蛋白還原為Cu+1離子。兩個聯喹啉二羧酸BCA分子和一個 Cu+1離子形成紫色的螯合物這樣在有蛋白存在情況下,Cu-BCA形成的螯合物在562 nm出有最大光吸收,以750 nm光系數為標準化。

商業化的BCA試劑盒有兩種蛋白檢測范圍:

a.常規檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為20:1,這個試劑盒檢測范圍從0.20~8.0 mg/mL(BSA)。當使用基座檢測時,推薦使用4 μL 樣品和80 μLBCA試劑。

b.微量檢測使用1:1試劑/樣品,可以檢測蛋白濃度范圍從0.01~0.20 mg/mL要準備足夠的樣品來做基座檢測,建議使用10 μL樣品和10 μLBCA試劑(使用P管)。

按照試劑盒廠家建議的操作來構建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程使用相同的時間和溫度。

【注】:如果試驗溫度高于60度,最好使用2倍的試驗體積,避免揮發導致樣品減少,從而影響測試結果。

Lowry法蛋白定量是一個應用非常廣泛的蛋白定量方法。Lowry法是蛋白與硫酸銅在堿性環境下反應形成銅-蛋白復合物。Folin-Ciocalteu試劑可以有效的還原銅復合物,產生與蛋白量成比例的藍色產物,可以在650 nm檢測,405 nm處校準。試驗中使用的試劑可以從多個廠家購買。

要準確準備標準品,推薦使用20 μL的蛋白樣品和100 μL的Lowry試劑來做反應。在本儀器上可以檢測的樣品濃度范圍是從0.20~4 mg/mL。按照試劑盒生產廠家的說明來準備標準品和樣品。在所有操作過程中要保持每個樣品處理時間和環境溫度一致。由于本儀器基座檢測的濃度范圍比常規檢測更大,在構建標準曲線時需要構建比廠家建議更寬的標準曲線范圍。檢測需要的樣品量推薦使用2 μL。

Bradford是常用的蛋白定量的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測。Bradford法是根據蛋白能夠使考馬斯亮藍嘗試吸收位移來檢測蛋白濃度的,一般在595 nm處檢測吸光度。蛋白-染料復合物在595 nm處檢測并在750 nm處做標準化。可以從多個廠家購買相應的試劑盒。

商業化的 Bradford 試劑盒有兩種蛋白檢測范圍:

a.常規檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1,這個試劑盒檢測范圍從0.10~8.0 mg/mL(BSA)。最佳線形范圍在0.01~1 mg/mL。當使用基座檢測時,推薦使用4 μL 樣品和200 μL Bradford 試劑。

b.微量檢測使用1:1 試劑/樣品,可以檢測蛋白濃度范圍從15 ug/mL 至125 ug/mL。要準備足夠的樣品來做基座檢測,建議使用10 μL樣品和10 μL BCA 試劑(使用PCR管)。按照試劑盒廠家建議的操作來構建標準曲線和樣品準備。確保在所有檢測過程中使用相同的時間和溫度。

【注】:如果試驗溫度高于60度,最好使用2倍的試驗體積,避免揮發導致樣品減少,從而影響測試結果。

Bradford試劑盒中同樣包括用于構建標準曲線的標準品。由于本儀器能夠檢測比常規比色皿檢測更高的濃度,用戶需要使用比廠家推薦的標準品更高的濃度。

 圖片14.png

2) 界面解析:在主界面,點擊“比色法”圖標進入如下界面:

該界面主要布局同核酸檢測初始界面相同,此處重點介紹不同的幾個布局:。

:點擊,選擇比色法類型;

:當前顯示與前面設定的比色法類型相關聯的曲線。本系統提供三種曲線類型:一次多項式,二次多項式,三次多項式。

3) 操作步驟:

設定項目名稱和樣品編號、比色法類型及對應曲線;

使用緩沖液建立空白對照:取2 μL空白溶液加到下基座上,放下上基座并點擊“空白”;

使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈;

2 μL樣品滴加到下基座上,放下上基座,點擊“樣品”進行檢測,檢測完成后界面如下圖。

【注】:每次檢測的樣品都必須是剛加入的。

4) 標準曲線:

比色法檢測之前需要建立標準曲線,一個最簡單的標準曲線可以有兩個點組成,但是為了保證檢測的準確性,建議5個以上,且標準品的濃度范圍要覆蓋樣品的整個濃度范圍,盡量均布。這里介紹比色法標準曲線界面的各項功能與操作方法。

點擊“曲線”,進入標準曲線界面,如下圖,此時界面沒有標準曲線,需新建標準曲線,才能在比色法檢測界面中進行相應的樣品檢測。

 

圖片15.png

 

 

單擊“新建曲線按鈕”,彈出如下界面:
圖片16.png

 

點擊“g/ml”,選擇標準樣品單位,在輸入框中輸入相應濃度,標準樣品濃度輸入沒有次序要求,只需在檢測時,添加的檢測樣品與所選濃度值一致即可。

圖片17.png

c) 在上圖所示界面中單擊標準品名,選擇一標準品,被選中的標準品底色變為藍色,然后依照空白、樣品檢測順序測得該標準品的吸光度。依照同樣的步驟測量其他標準品的吸光度。每個標準樣品的吸光度值可以連續測量5測,取平均值作為標準曲線的樣品點。點擊某一標準品名或者長按該標準品所屬行標準品名以外位置,選中后點擊右側刪除按鈕可以將該標準品刪除。

d) 全部標準樣品檢測完成后,點擊“保存曲線”保存新建的曲線。

【注】:新建的曲線必須保存才能顯示在檢測界面中曲線下拉菜單中。

圖片18.png

e) 全部標準樣品檢測完成后,單擊“顯示曲線”顯示當前建立的曲線,如下圖所示:

6. Uv-Vis全波長掃描:

1) 概述:

Uv-Vis功能使本儀器可以像普通紫外-可見分光光度計一樣測量樣品200-800 nm的吸光度。

本儀器根據檢測溶液習慣值范圍自動選擇檢測光程,最大能夠檢測相當于10 mm光程下90的吸光度。

 

圖片19.png

2) 界面解析:在主界面,點擊“Uv-Vis”圖標進入如下界面:

 

該界面主要布局同核酸檢測初始界面相同,此處重點介紹不同的幾個布局:

圖片20.png

 點擊右下角“空白”,校對完成后,彈出下圖界面;
 Uv-Vis檢測初始界面右側區域,如下圖,可根據需要在輸入框中輸入特征波長,樣品檢測完成后顯示該波長的吸光度,波長輸入必須在樣品檢測之前,之后無效。

 

圖片21.png

 空白校對完成后,點擊右下角“樣品”,顯示可用,點擊該按鍵,彈出下圖界面。該界面顯示樣品在200-800 nm各波長的吸光度。

圖片22.png

3) 操作步驟:

設定項目名稱和樣品編號與特征波長;

使用緩沖液建立空白對照:取2 μL空白溶液加到下基座上,放下上基座并點擊“空白”;

使用干凈無塵布把基座上的空白溶液擦干凈;

2 μL樣品滴加到下基座上,放下上基座,點擊“樣品檢測”進行檢測;

【注】:每次檢測的樣品都必須是剛加入的。

檢測完成后,必須用干凈的無塵布擦掉上下基座上的樣品,才可以檢測下一個樣品。

 圖片23.png

 

4) Uv-Vis檢測數據:

該界面主要布局同核酸檢測數據界面相同,同名按鍵操作與功能相同,詳細情況請參考核酸檢測章節。

圖片24.png

需要特殊說明的是,如需查看其他波長的吸光度,由于液晶屏支持多點觸控,請放大或者縮小曲線,在圖示波長的位置顯示該波長的吸光度,如下圖所示:

 

圖片25.png

7. OD600

1) 概述:

OD600指的是某種溶液在600 nm波長處的吸光度。

它的一個重要應用,就是利用細菌的吸光度來測量細菌培養液的濃度,從而估計細菌的生長情況。

2) 操作步驟:

設置項目名稱,樣品編號一般情況下系統自動給定;

空白:空白可以是空氣、空比色皿或帶空白溶液的比色皿,視實驗要求而定;

空白完成后,將檢測溶液加入比色皿,溶液添加量在2 mL ~ 3 mL;

點擊“樣品”進行檢測,測量結果顯示在界面右側。

8.系統設置

圖片26.png

在主界面點擊“設置”圖標,進入如下系統設置界面:

圖片27.png

1) 時間設置:點擊“時間”圖標,進入系統時間設置主界面

 

 圖片28.png

 

2) 語言選擇:點擊“語言”圖標,彈出語言選擇對話框,選擇需要的語言,點擊確定即可完成語言選擇

 

3) 升級:將升級軟件放在U盤的根目錄下,再將U盤插入本機,然后點擊“升級”圖標,彈出對話框,如需升級,點擊安裝。安裝結束,系統完成升級。

4) 維護:維護功能只在生產、維修環節使用,用戶使用時不涉及該界面,且需專業技術人員在輸入密碼后才能進入維護界面,進行儀器調試、維護,這里不做詳細說明。

圖片29.png

5) 格式:本機提供2種數據格式,分別為*.xls和*.txt。用戶可以根據需要選擇合適的格式。

 

9.選配功能

圖片30.png

打印機功能:各個模塊都有打印功能,下面以核酸檢測為例

開機前插入打印機usb,連接打印機,開機檢測樣品后,勾選需打印的數據,點擊批量打印按鈕,即可打印檢測數據。可多條同時打印。

 

故障分析

序號

故 障 現 象

原 因 分 析

處 理 方 法

1

儀器不能啟動

電源未接通

開關不良

電源適配器不良

檢查電源,重新插拔電源

調換開關

與供應商或廠家聯絡

2

核酸測試結果不準確

液柱沒有形成

基座污染

其他

重新加樣、確保形成液柱

用純水多次擦洗基座。

與供應商或廠家聯絡

3

OD600模塊失效

數據線與主板連接不良

與供應商或廠家聯絡

4

光強不足報警

分析模塊故障

導光光纖折斷

與供應商或廠家聯絡

5

觸摸屏跳點

供電電源沒有接地

提供有效接地的供電電源。

6

通訊超時

分析模塊通訊無回應

重啟儀器

如無法解決請與供應商或廠家聯絡

 

注意事項

本儀器是室內使用的產品。

操作人員不要試圖打開或維修儀器,這樣做會使您失去保修資格,也可能會受到電擊。如需修理,由本公司負責維修。

停止工作時應關閉電源,長時間不使用本儀器時,應拔下電源插頭,并用軟布或塑料紙覆蓋儀器以防止灰塵進入。

在下列情況下,應立即將儀器的電源插頭從電源插座上拔掉,并與供應商聯系或請經過培訓的維修人員進行處理:

有液體灑落進儀器內部;

儀器經雨淋或水澆;

儀器工作不正常,特別是有任何不正常的聲音或氣味出現;

儀器掉落或外殼受損;

儀器功能有明顯變化。

 

后服務

a)保修內容

本儀器自交貨之日起1個月內,對因材料和制造方面的缺陷引起的故障,本公司將負責保換。

本儀器自交貨之日起12個月內,對因材料和制造方面的缺陷引起的故障提供保修。在保修期內,本公司將對被證明是有缺陷的儀器有選擇地進行修理或更換。

保修的產品必須由用戶送至本公司確定的維修部門。對于儀器從用戶送往維修部門的運費由用戶自行支付。本公司承擔將儀器返回用戶的運費。

對于保修期外的修理,本公司將適當收取維修的成本費用。

b)保修范圍

上述保修不適合于因用戶使用維護不當、在不符合要求的條件下使用、未經授權擅自維修或改裝而引起的損壞。

 

HB221208

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